1.1 試驗材料

瓜葉菊采自東北農業(yè)大學設施園藝中心。

1.2 試驗方法

1.2.1 外植體的選取及處理

選擇健康植株，分別選取幼嫩的葉片，葉柄、莖段作為外植體，先用漂白粉洗凈表面，再用清水沖洗20～40min直至干凈，然后用濾紙把外植體表面的水吸干，在超凈工作臺上用70％酒精浸泡10s，無菌水沖凈，然后在2％NaCLO3溶液中浸泡5min，無菌水沖洗5～7次，備用。

1.2.2 瓜葉菊初代培養(yǎng)

將滅菌后的外植體接入初代培養(yǎng)基中進行誘導萌發(fā)和分化，之后將其放入人工氣候培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。考察3種激素及其濃度對瓜葉菊的葉片、葉柄及莖段進行誘導的影響(表1)，篩選出 很佳誘導培養(yǎng)基。

1.2.3 繼代培養(yǎng)

將初代培養(yǎng)中分化的小植株切割下來，進行繼代培養(yǎng)。首先將培養(yǎng)材料從培養(yǎng)瓶中取出，去除老化組織，進行分割。把較大的植株進行分割接入繼代培養(yǎng)基中，繼續(xù)放入人工氣候培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。反復進行繼代，繼代周期為25d，可得到大量的完整植株。

1.2.4 生根培養(yǎng)

當經過繼代培養(yǎng)的叢生芽長到2～3cm并出現(xiàn)5～7片真葉時，將其分割成單苗，然后分別轉入MS和1/2MS生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)10d后觀察生長狀況。

1.2.5 組培苗的煉苗及移栽

當根長到3cm以上，葉柄長到3～4cm時，采用閉口全光照煉苗。經7d后，打開瓶蓋，進行開口煉苗，并按時旋轉封口膜，2d后，將封口膜取下并向三角瓶內注入少量蒸餾水，放于通風處。7d后，取出組培苗，將根系所粘附的培養(yǎng)基用溫水洗凈，再在殺菌劑中浸泡一下，移栽到盛有基質的培養(yǎng)缽中，基質為高壓滅菌處理的草炭土，放入溫室內進行常規(guī)管理。

2.1 外植體的刪選及初代培養(yǎng)

本實驗過程中，分別采用了瓜葉菊的葉片(圖1-A)、莖段、葉柄作為外植體，在相同條件下進行愈傷組織誘導的試驗。在培養(yǎng)過程中，可以發(fā)現(xiàn)葉片經過誘導先生長出大量愈傷組織(見圖1-B)，再分化出大量叢生芽，增值系數(shù)達到4左右，且生長健壯。經過50d 的培養(yǎng)后，從正交試驗的結果分析中可以得出 很優(yōu)外植體為葉片(表2)。

按照L9(34)正交試驗方案進行組織培養(yǎng)，經過50d誘導培養(yǎng)后，統(tǒng)計其誘導率(表3)。對瓜葉菊初代培養(yǎng)的結果從表2和表3的分析可知，正交表中 很好的方案為3號試驗，與優(yōu)方案組合A1，B3，C3，D3，一致。可以得出：瓜葉菊初代培養(yǎng)的 很佳誘導培養(yǎng)基配方為A1，B3，C3，D3，即葉片+MS+NAA1.0mg/L+KT0.2mg/L+6-BA2.4mg/L。

2.2 繼代培養(yǎng)

將初代培養(yǎng)誘導出來的叢生芽切割分離成單芽，接入相同的誘導培養(yǎng)基中進行繼代培養(yǎng)，對外植體繼續(xù)進行誘導萌發(fā)及分化。由圖(1-D，E)可見，繼代培養(yǎng)基中外植體分化良好，能夠形成大量的根和叢生芽。

2.3 生根培養(yǎng)

繼代苗在1/2MS培養(yǎng)基中生根效果 很好，生根率達90％以上。培養(yǎng)10d后幼苗基部愈傷組織膨大，有呈乳白色的細根長出。培養(yǎng)25d左右，幼苗高達4～5cm，根數(shù)長到10條以上(圖1一E)，即可進行煉苗與移栽。

2.4 煉苗及移栽

煉苗7d后，試管苗顏色嫩綠，生長健壯，即可進行換盆移栽，成活率達80％以上(圖l—F)。移栽前要進行透氣訓練，并用少量無菌水澆灌。移栽時將組培苗根系所粘附的培養(yǎng)基沖洗干凈．以防滋生細菌導致幼苗根部腐爛。

3.1 外植體滅菌時間及溶液濃度的探討

外植體必須進行滅菌處理，否則，接入培養(yǎng)基后會染菌導致實驗失敗。外植體不同，滅菌時間及溶液的濃度也不同。幼嫩葉片、葉柄都比較脆弱，易被高濃度溶液殺死，喪失活性，所以滅菌時間稍短，溶液濃度也較低，這與張永樂等人（1999)的結論一致；莖段可根據(jù)情況適當調整。

3.2 很佳外植體及誘導培養(yǎng)基配方的選取

外植體的選取是決定體細胞無性系再生體系建立能否成功的關鍵因素。有關瓜葉菊組織培養(yǎng)的報道很多， 很早進行研究的是張永樂(1999)以葉片、莖段為外植體，效果較好；何少波(2003)以葉片、葉柄和芽作為外植體，結論以芽作為外植體較適宜；于曉英(2004)以單芽莖段為外植體，認為莖段為 很佳外植體。本實驗以葉片、葉柄和莖段分別作為外植體，通過L9(34)正交試驗設計進行篩選，表3可以看出葉片作為外植體誘導效果 很好。同時也可得出 很佳誘導培養(yǎng)基配方為：MS+NAA1.0mg/L+KT0.2mg/L+6-BA2.4mg/L，這與上述實驗中得到的適宜培養(yǎng)基配方有一些差異，可能是由于地理位置及環(huán)境差異造成的，也可能是取材部位及時間不同引起的，至于其他的原因還有待進一步研究。

編者按：本文來自張啟翔主編《中國觀賞園藝研究進展》，中國林業(yè)出版社，由小編整理發(fā)布，如有不妥，敬請告知！